پایان نامه بررسی مقایسه ای شیوع عفونت هلیکوباکتر پیلوری، هلیکوباکتر هپاتیکوس ، هلیکوباکتر بیلیس و هلیکوباکتر پولوروم

اختصاصی از حامی فایل پایان نامه بررسی مقایسه ای شیوع عفونت هلیکوباکتر پیلوری، هلیکوباکتر هپاتیکوس ، هلیکوباکتر بیلیس و هلیکوباکتر پولوروم دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

فرمت فایل : WORD (قابل ویرایش)

تعداد صفحات:193

پایان نامه جهت دریافت درجه کارشناسی ارشد (M.Sc)
گرایش میکروبیولوژی

عنوان : بررسی مقایسه ای شیوع عفونت هلیکوباکتر پیلوری، هلیکوباکتر هپاتیکوس ، هلیکوباکتر بیلیس و هلیکوباکتر پولوروم در کیسه صفرای بیماران مبتلا و غیرمبتلا به بیماری های صفراوی در بیمارستان الزهرا (س) اصفهان

فهرست مطالب:
فصل اول: کلیات تحقیق    1
1-1-1) جنس هلیکوباکتر    3
1-1-2) عوامل حدت هلیکوباکتر پیلوری    5
1-1-3) پروتیین های شوک حرارتی هلیکوباکتر پیلوری    7
1-1-4) هلیکوباکتر هپاتیکوس    8
1-1-5) هلیکوباکتر بیلیس    10
1-1-6) هلیکوباکتر پولوروم    11
1-2)کیسه صفرا و مجاری صفراوی    12
1-2-1) فیزیولوژی تشکیل و جریان صفرا    12
1-2-2) ترشح صفرا و ترکیب آن    13
1-2-3) اسیدهای صفراوی    14
1-2-5) کیسه صفرا و اعمال اسفتکتری    16
1-3) بیماری‌های کیسه صفرا    17
1-3-1) سنگ‌های کیسه صفرا    17
1-3-3) سنگهای کلسترولی و لجن صفراوی.    19
1-3-4) ریسک فاکتور ها    23
1-3-4-1) سن و جنسیت    23
1-3-4-2) نژادی و جغرافیایی    23
1-3-4-3) محیط    23
1-3-4-4) اختلالات اکتسابی    24
1-3-4-5) ارث    24
1-3-5) لجن صفراوی    24
1-3-6)سنگ کلسترولی    26
1-3-6-1) سنگ‌های پیگمانی    26
تشخیص    27
1-3-7) علائم بیماری سنگ کیسه صفرا.    28
1-3-7-1) سیر طبیعی    29
درمان    30
1-3-7-2) درمان جراحی    30
1-3-7-3) درمان طبی- حل کردن سنگ کیسه صفرا    31
1-3-8) کله سیستیت حاد    32
1-3-8-1) مورفولوژی    35
1-3-8-2) خصوصیات بالینی کوله سیستیت حاد    36
1-3-8-3) کله سیستیت بدون سنگ    36
1-3-9) کله سیستوپاتی بدون سنگ    37
1-3-10) کله سیستیت آمفیزماتو    38
1-3-11-1) کله سیستیت مزمن    38
1-3-11-2) مرفولوژی    40
1-3-11-3) خصوصیات بالینی کوله سیستیت مزمن    40
1-3-11-4) خصوصیات بالینی تشخیص کوله سیستیت حاد و مزمن    40
1-4) اختلالات مجاری صفراوی خارج کبدی    41
1-4-1) کوله دوکولیتاز و کلانژیت صعودی    41
1-4-2) آترزی صفراوی خارج کبدی    42
1-4-2-1) سیر بالینی    43
1-4-3) تومورها    43
1-4-3-1-1) سرطان کیسه صفرا    43
1-4-3-1-2)مورفولوژی:    44
1-4-3-1-3) خصوصیات بالینی    44
1-4-3-2) کارسینوم مجاری صفراوی خارج کبدی، از جمله آمپول واتر    45
1-4-3-2-1) مورفولوژی    45
1-4-3-2-2) خصوصیات بالینی    46
فصل دوم: سوابق مربوط    49
فصل سوم: مواد و روشها    65
3-1) چکیده روش تحقیق    66
3-1-2) جامعة مورد مطالعه    67
3-1-3) منطقه مورد پژوهش    68
3-1-4) روش نمونه گیری    72
3-2-1) آماده سازی  سنگ صفرا برای استخراج  DNA    74
3-2-2) آماده سازی  لایه مخاطی کیسه صفرا برای استخراج  DNA    74
3-2-3) آماده سازی مایع صفراوی برای استخراج  DNA    74
3-3) روش استخراج DNA  به روش کیت سینا ژن    75
3-4) واکنش زنجیره ای پلیمرازی    76
3-4-1)مواد    77
3-4-1-1) میکروتیوب ها و نوک سمپلرها    77
3-4-1-2) محلول بافری PCR  با غلظت 5X    77
3-4-1-3) Mgcl 2    77
3-4-1-4) Kcl    78
3-4-1-5) Tris Hcl    78
3-4-1-6) مخلوط نوکلئوزیدها (dNTPs)    78
3-4-1-7) Taq DNA polymerase    79
3-4-1-7-1) DNA polymerase Smart    79
3-4-1-8) پرایمرها    79
3-4-1-9) سایز مارکر    80
3-4-1-10) اتیدیوم بروماید    81
3-4-1-11) Loading Buffer    81
3-4-1-12) ژل آگاروز    81
3-4-2) مواد لازم برای تهیه  TBE 1X    82
3-4-2-1) طرز تهیه بافر TBE 1X    82
3-4-3) نرم افزارهای مورد استفاده    82
3-9) ژل الکتروفورز محصولات PCR    90
3-10) کشت هلیکوباکتر    91
3-11-1) بررسی میزان IgG هلیکوباکتر پیلوری در سرم خون    92
3-11-2) شیکر الیزا    95
3-11-3) شوینده الیزا    96
3-11-4) خواننده الیزا    97
3-11-5) مراحل انجام آزمون الیزا که تقریبا در تمام انواع آن مشترک است عبارت است از    98
3-11-6) روش کار با کیت Monobind Anti-H. Pylori IgG    99
3-11-7) مراحل انجام آزمایش H. Pylori IgG    100
فصل چهارم: نتایج    102
4-1 ) نتایج مربوط به افراد مورد مطالعه در این پژوهش    103
4-2) نتایج مربوط به حضور ژن hsp60 در بیماران کله سیستیت مزمن    114
4-3) نتایج مربوط به حضور ژن hsp60 در بیماران کله سیستیت حاد    116
4-4) نتایج مربوط به حضور ژن hsp60 در مایع صفرا گروه شاهد    118
4-5) نتایج مربوط به میزان فراوانی نسبی تست IgG هلیکوباکتر    121
4-6) نتایج مربوط به میزان فراوانی نسبی BMI    127
4-7) نتایج مربوط به ژن 16s rRNA هلیکوباکتر بیلیس    131
4-8)  نتایج مربوط به میزان فراوانی نسبی هلیکوباکتر هپاتیکوس    133
4-9) نتایج مربوط به میزان فراوانی نسبی هلیکوباکتر پولوروم    133
4-10) نتایج مربوط به میزان فراوانی نسبی هلیکوباکتر پیلوری، هلیکوباکتر هپاتیکوس، هلیکوباکتر بیلیس و هلیکوباکتر پولوروم در سنگ کیسه صفرا در بیماران کله سیستیت مزمن    133
4-11) نتایج مربوط به کشت هلیکوباکتر    133
فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری    134
پیشنهادات    148
منابع    149


فهرست جداول
جدول 2-1) گزارش سازمان بهداشت جهانی از برآورد بروز، مرگ و میر ، و میزان شیوع انواع سرطان در مردها و زن ها  در طول  5 سال[117]    62
جدول 2-2) گزارش سازمان بهداشت جهانی از برآورد بروز، مرگ و میر ، و میزان شیوع انواع سرطان در زن ها در طول  5 سال[117]    63
جدول 2-3) گزارش سازمان بهداشت جهانی از برآورد بروز، مرگ و میر ، و میزان شیوع انواع سرطان در زن ها در طول  5 سال[117]    64
جدول 3-1) نمونه ای از پرسشنامه مورد استفاده در این پژوهش    70
جدول 3-2) فرم رضایت اخلاق پزشکی مورد تایید کمیته منطقه ای اخلاق پزشکی دانشگاه علوم پزشکی اصفهان برای این تحقیق    71
جدول 3-3) مقادیر مواد لازم برای PCR ژن Hsp60 هلیکوباکتر پیلوری    83
جدول3-4) برنامه دمایی دستگاه ترموسایکلر برای تکثیر ژن Hsp 60 هلیکوباکتر پیلوری    83
جدول 3-5) مقادیر مواد لازم برای PCR ژن s rRNA16 هلیکوباکتر پولوروم    85
جدول 3-6) برنامه دمایی دستگاه ترموسایکلر برای تکثیر ژن  16s rRNAهلیکوباکتر پولوروم    85
جدول 3-7) مقادیر مواد لازم برای PCR ژن s rRNA 16هلیکوباکتر بیلیس    87
جدول 3-8) برنامه دمایی دستگاه ترموسایکلر برای تکثیر ژن 16s rRNA هلیکوباکتر بیلیس    87
جدول 3-9) مقادیر مواد لازم برای PCR ژن s rRNA16 هلیکوباکتر هپاتیکوس    89
جدول 3-10) برنامه دمایی دستگاه ترموسایکلر برای تکثیر ژن  s rRNA16هلیکوباکتر هپاتیکوس    89
جدول 3-11) مواد مورد نیاز برای ساخت محیط کشت بهینه سازی شده برای رشد فرم کوکوئید هلیکوباکتر پیلوری    92
جدول4-1-1) مقایسه فراوانی نسبی هر دوجنس بیماران کله سیستیت حاد در گروه های سنی مختلف    105
جدول4-1-2) مقایسه فراوانی نسبی جنس زن بیماران کله سیستیت حاد در رده های سنی مختلف    106
جدول4-1-3) مقایسه فراوانی نسبی جنس مرد بیماران کله سیستیت حاد در رده های سنی مختلف    107
جدول 4-1-4) مقایسه فراوانی نسبی هر دوجنس بیماران کله سیستیت مزمن در رده های سنی مختلف    108
جدول 4-1-5) مقایسه فراوانی نسبی جنس زن بیماران کله سیستیت مزمن در رده های سنی مختلف    109
جدول4-1-6) مقایسه فراوانی نسبی جنس مرد بیماران کله سیستیت مزمن در رده های سنی مختلف    110
جدول 4-1-7) مقایسه فراوانی نسبی هر دوجنس گروه شاهد در رده های سنی مختلف    111
جدول 4-1-8) مقایسه فراوانی نسبی جنس زن گروه شاهد در ر ده های سنی مختلف    112
جدول 4-1-9) مقایسه فراوانی نسبی جنس مرد گروه شاهد در رده های سنی مختلف    113


فهرست تصاویر
تصویر3-1) –A موقعیت جغرافیایی استان اصفهان در ایران. B- نقشه جخرافیایی استان اصفهان    69
تصویر3-2) ست جراحی کله سیستکتومی لاپراسکوپیک    72
تصویر 3-3) دو روش کله سیستکتومی باز و لاپراسکوپیک    73
تصویر3-4)کلانژیوپانکراتوگرافی برگشتی آندوسکوپیک    73


فهرست نمودار
نمودار 4-1-1) مقایسه فراوانی نسبی هر دوجنس بیماران کله سیستیت حاد در گروه های سنی مختلف    105
نمودار 4-1-2) مقایسه فراوانی نسبی جنس زن بیماران کله سیستیت حاد در رده های سنی مختلف    106
نمودار 4-1-3) مقایسه فراوانی نسبی جنس مرد بیماران کله سیستیت حاد در رده های سنی مختلف    107
نمودار 4-1-4) مقایسه فراوانی نسبی هر دوجنس بیماران کله سیستیت مزمن در رده های سنی مختلف    108
نمودار 4-1-5) مقایسه فراوانی نسبی جنس زن بیماران کله سیستیت مزمن در رده های سنی مختلف    109
نمودار 4-1-6) مقایسه فراوانی نسبی جنس مرد بیماران کله سیستیت مزمن در رده های سنی مختلف    110
نمودار 4-1-7) مقایسه فراوانی نسبی هر دوجنس گروه شاهد در رده های سنی مختلف    111
نمودار 4-1-8) مقایسه فراوانی نسبی جنس زن گروه شاهد در ر ده های سنی مختلف    112
نمودار 4-1-9) مقایسه فراوانی نسبی جنس مرد گروه شاهد در رده های سنی مختلف    113
نمودار 4-2-1) مقایسه فراوانی نسبی ژن hsp60 هلیکوباکتر پیلوری در مایع صفرا بیماران زن و مرد کله سیستیت مزمن در رده های سنی مختلف    114
نمودار 4-2-2) مقایسه فراوانی نسبی ژن hsp60 هلیکوباکتر پیلوری در مایع صفرا بیماران زن کله سیستیت مزمن در رده های سنی مختلف    115
نمودار 4-2-3) مقایسه فراوانی نسبی ژن hsp60 هلیکوباکتر پیلوری در مایع صفرا بیماران مرد کله سیستیت مزمن در رده های سنی مختلف    115
نمودار 4-3-1) مقایسه فراوانی نسبی ژن hsp60 هلیکوباکتر پیلوری در مایع صفرا بیماران زن و مرد کله سیستیت حاد در رده های سنی مختلف    116
نمودار 4-3-2) مقایسه فراوانی نسبی ژن hsp60 هلیکوباکتر پیلوری در مایع صفرا بیماران زن کله سیستیت حاد در رده های سنی مختلف    117
نمودار4-3-3) مقایسه فراوانی نسبی ژن hsp60 هلیکوباکتر پیلوری در مایع صفرا بیماران مرد کله سیستیت حاد در رده های سنی مختلف    117
نمودار 4-4-1) مقایسه میزان فراوانی نسبی ژن hsp60 هلیکوباکتر پیلوری در هر دو جنس گروه شاهد در رده های سنی مختلف    118
نمودار 4-4-2) مقایسه موارد مثبت hsp60 در مایع صفرا بیماران کله سیتیت مزمن با گروه شاهد در رده های سنی مختلف    119
نمودار 4-4-3) مقایسه موارد مثبت hsp60 در مایع صفرا بیماران کله سیتیت حاد با گروه شاهد در رده های سنی مختلف    119
نمودار 4-4-4) میزان فراوانی نسبی ژن hsp60 هلیکوباکتر پیلوری در بافت کیسه صفرا زنان کله سیستیت حاد در رده های سنی مختلف    120
نمودار 4-5-1) میزان فراوانی نسبی نتایج مثبت و منفی تست IgG هلیکوباکتر پیلوری  در هر دو جنس بیماران کله سیستیت حاد    121
نمودار 4-5-2) میزان فراوانی نسبی نتایج مثبت و منفی تست IgG هلیکوباکتر پیلوری  در زنان بیمار کله سیستیت حاد    122
نمودار 4-5-3) میزان فراوانی نسبی نتایج مثبت و منفی تست IgG هلیکوباکتر پیلوری  درمردان بیمار کله سیستیت حاد    122
نمودار 4-5-4) میزان فراوانی نسبی نتایج مثبت و منفی تست IgG هلیکوباکتر پیلوری  در هر دو جنس بیماران کله سیستیت مزمن    123
نمودار 4-5-5) میزان فراوانی نسبی نتایج مثبت و منفی تست IgG هلیکوباکتر پیلوری در زنان بیمار کله سیستیت مزمن    123
نمودار 4-5-6) میزان فراوانی نسبی نتایج مثبت و منفی تست IgG هلیکوباکتر پیلوری  در مردان بیمار کله سیستیت مزمن    124
نمودار 4-5-7) میزان فراوانی نسبی نتایج مثبت و منفی تست IgG هلیکوباکتر پیلوری  در هر دو جنس گروه شاهد    125
نمودار 4-5-8) میزان فراوانی نسبی نتایج مثبت و منفی تست IgG هلیکوباکتر پیلوری در زنان گروه شاهد    125
نمودار 4-5-9) میزان فراوانی نسبی نتایج مثبت و منفی تست IgG هلیکوباکتر پیلوری در مردان گروه شاهد    126
نمودار4-6-1) مقایسه میزان فراوانی نسبی دسته های مختلف BMI در هر دو جنس بیمار کله سیستیت مزمن ، در رده های سنی مختلف    127
نمودار4-6-2) مقایسه میزان فراوانی نسبی دسته های مختلف BMI زنان بیمار کله سیستیت مزمن ، در رده های سنی مختلف    128
نمودار 4-6-3) مقایسه میزان فراوانی نسبی دسته های مختلف BMI مردان بیمار کله سیستیت مزمن ، در رده های سنی مختلف    128
نمودار 4-6-4) مقایسه میزان فراوانی نسبی دسته های مختلف BMI در هر دو جنس بیمار کله سیستیت حاد ، در رده های سنی مختلف    129
نمودار 4-6-5) مقایسه میزان فراوانی نسبی دسته های مختلف BMI زنان بیمار کله سیستیت حاد ، در رده های سنی مختلف    129
نمودار 4-6-6) مقایسه میزان فراوانی نسبی دسته های مختلف BMI مردان بیمار کله سیستیت حاد، در رده های سنی مختلف    130
نمودار 4-7-1) فراوانی نسبی ژن s rRNA16 هلیکوباکتر  بیلیس در مایع صفرا بیماران مرد کله سیستیت حاد    131
نمودار 4-7-2) بررسی فراوانی نسبی ژن  16 s rRNA هلیکوباکتر بیلیس در مایع صفرا بیماران زن کله سیستیت مزمن در رده های سنی مختلف    132


فهرست فرمول ها
فرمول 1-1    48
فرمول 2-1    67


چکیده:
زمینه و هدف: سنگ کیسه صفرا یکی از علت های عمده جراحی دستگاه گوارش بوده، علاوه بر این، میزان بیماری های صفراوی و سنگ کیسه صفرا به تدریج رو به افزایش است. اخیرا، نویسندگان متعددی، گزارشاتی مبنی بر حضورDNA  هلیکوباکتر پیلوری و هلیکوباکتر های مقاوم به صفرا در درخت صفراوی انسان و کلونیزاسیون در دستگاه صفراوی حیوانات داشته اند. در حال حاضر هدف از این بررسی، طراحی مطالعه مورد-شاهدی برای برسسی حضور گونه های هلیکوباکتر، به خصوص هلیکوباکتر پیلوری، هلیکوباکتر هپاتیکوس، هلیکوباکتر بیلیس و هلیکوباکتر پولوروم، در سنگ، مایع و بافت بیماران مبتلا به بیماری های صفراوی و مایع صفرای بیماران غیر مبتلا به بیماری های صفراوی در بیمارستان الزهرا(س) بوده است.
مواد و روش ها: سرم خون و مایع صفرای 25 بیمار غیر مبتلا به بیماری های صفراوی تحت کلانژیوپانکرانوگراف برگشتی، به عنوان گروه شاهد جمع آوری گردید. سرم خون، مایع، سنگ و بافت کیسه صفرای 52 بیمار تحت کله سیستکتومی لاپراسکوپی، به عنوان گروه مورد جمع آوری گردید؛ از این بین 24 مورد کله سیتیت حاد و 28 مورد کله سیستیت مزمن تشخیص داده شد. هر سه گروه از لحاض ترکیب سن و جنس قابل مقایسه می باشند. در این نمونه ها، حضور هلیکوباکتر پیلوری بوسیله پرایمر اختصاصی ژن hsp60 ، و پرایمر اختصاصی 16s rRNA برای DNA هلیکوباکتر هپاتیکوس، هلیکوباکتر بیلیس و هلیکو باکتر پولوروم بوسیله واکنش های زنجیره ای پلیمرازی مورد ارزیابی قرار گرفت. مایع صفرا در محیط کشت مایع وجامد R (توصیف شده توسط ریچارد و همکاران) کشت داده شد. سرم های خون برای بررسی کمی ایمونوگلوبولین G هلیکوباکتر پیلوری بوسیله تست الیزا مورد ارزیابی گرفت.
نتایج:
21 از 24 (87.5 ٪) بیماران مبتلا به بیماری های کوله سیستیت حاد و 25 از28 مورد (89.2 ٪) در بیماران مبتلا به بیماری های کوله سیستیت مزمن ، و 20 از 25 (80 ٪) نفر در گروه شاهد، نشان دهنده افزایش سطح ایمونوگلوبولین G خاص هلیکوباکتر پیلوری بوده اند.
به ترتیب DNA هلیکوباکتر پیلوری در 6 از 24 (25 ٪) مایع صفرا کوله سیستیت حاد و 2 از 28(7%) مایع صفرا کوله سیستیت و 1 از 24 (4.2 ٪) مخاط کیسه صفرا کوله سیستیت حاد و 1 از 28 (3.5٪) مخاط کیسه صفرا کوله سیستیت مزمن مزمن تشخیص داده شد. DNA هلیکوباکتر bilis در 1از 24(4.2%)مایع صفرا کوله سیستیت حاد، و 1 از 28 (3.5 ٪) مایع صفرا کوله سیستیت مزمن تشخیص داده شد. هیچ گونه هلیکوباکتر از کشت صفرا بدست نیامد. تمامی نمونه های استخراج شده DNA از لحاظ هلیکوباکتر هپاتیکوس و هلیکوباکتر پولوروم منفی می باشد. تمامی DNA های استخراج شده از مایع صفرای گروه کنترل از لحاظ هلیکوباکتر پیلوری، هلیکوباکتر هپاتیکوس، هلیکوباکتر بیلیس و هلیکوباکتر پولوروم منفی بوده اند. تمامی DNA استخراج شده از سنگ صفرا از لحاظ حضور ِDNA هلیکوباکتر منفی بوده ند.
نتیجه گیری:
نتایج این مطالعه نشان دهنده حضور DNA هلیکوباکتر پیلوری و هلیکوباکتر بیلیس در کیسه صفرا بیماران مبتلا به کله سیستیت حاد و مزمن بوده، و ارتباط احتمالی بین DNA هلیکوباکتر یافت شده با بیماری های صفراوی وجود دارد.
کلمات کلیدی: هلیکوباکتر پیلوری،  هلیکوباکتر هپاتیکوس،  هلیکوباکتر بیلیس،  هلیکوباکتر پولوروم،  کله سیستیت حاد، کله سیستیت مزمن،  ژن hsp60